通過上周對流式細(xì)胞儀原理的了解，童靴們可以更好的掌握實驗，今天接著干貨分享如何快速對流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)采集與分析，以便更準(zhǔn)確的得出結(jié)論。

一、數(shù)據(jù)采集及顯示

       將前向散射光檢測器、側(cè)向散射光檢測器及熒光檢測器收集的光信號轉(zhuǎn)換成電壓脈沖后，再通過模數(shù)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換成為計算機能夠儲存處理的數(shù)字信號。流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)以FSC標(biāo)準(zhǔn)格式存儲，該標(biāo)準(zhǔn)由“分析細(xì)胞學(xué)協(xié)會”制定。根據(jù)FSC標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)據(jù)存儲格式應(yīng)包括三個文件：樣本獲取文件，數(shù)據(jù)設(shè)置文件和數(shù)據(jù)分析結(jié)果。

       數(shù)據(jù)采集存儲完畢后，細(xì)胞亞群可以幾種不同格式顯示。單參數(shù)如FSC或FITC（FL1）可使用直方圖，橫軸表示熒光通道，縱軸表示在該通道內(nèi)收集到的細(xì)胞數(shù)量（如圖1）。處在同一通道的每一細(xì)胞符合該通道的信號值，而且具有相同的信號密度。通道右側(cè)信號的熒光強度明顯高于左側(cè)，越靠右側(cè)熒光亮度越強。雙參數(shù)可在二維散點圖中同時顯示，X軸顯示通道1（FL1），Y軸顯示通道2（FL2）。三維圖通過X，Y，Z三個軸分別顯示每個通道的細(xì)胞量。

二、設(shè)門

       通過設(shè)門的方法可以定義細(xì)胞亞群的區(qū)域。如，血樣本是混合細(xì)胞群，如果想單獨分析淋巴球細(xì)胞，可根據(jù)FSC或細(xì)胞大小，在FSC，SSC的散點圖中設(shè)門，其數(shù)據(jù)結(jié)果只反映淋巴細(xì)胞亞群的熒光特性。

三、細(xì)胞亞群的數(shù)據(jù)分析

       門內(nèi)細(xì)胞亞群的數(shù)據(jù)結(jié)果可在隨后的圖中顯示。我們可以通過單參數(shù)直方圖，二維點圖和三維圖來分析結(jié)果。單參數(shù)直方圖可定位邊界，二維點圖可設(shè)置象限標(biāo)志。如果需要，還可以建立數(shù)據(jù)統(tǒng)計表以輸出結(jié)果。

       直方圖可直觀的顯示單個參數(shù)的細(xì)胞數(shù)量。陰性對照用于決定直方圖中單參數(shù)的左右邊界。